基于肾脑相关理论探讨龟甲治疗老年性骨质疏松症的作用

作者:尚奇; 陈桂锋; 余蝶; 余富勇; 沈耿杨; 陈康; 张学来; 刘慧雯; 陈弘林; 余翔; 张志达; 招文华; 张鹏; 梁德; 江晓兵; 任辉
来源:中华中医药杂志, 2022, 37(10): 5973-5978.

摘要

目的:从肾脑相关理论探讨龟甲改善自然衰老小鼠骨质疏松症和海马衰老的作用。方法:(1)动物实验:22月龄C57/BL6雌性自然衰老小鼠分为模型组(4只)、龟甲干预组(7只),分别予0.9%氯化钠溶液或龟甲4 g/kg干预8周,取材前1周行旷场实验和水迷宫实验,然后取小鼠大脑、股骨,检测股骨微细结构、组织形态学和海马组织形态学。(2)细胞实验:提取胎鼠海马神经元,龟甲干预,CCK8和免疫荧光分别检测龟甲对海马神经元增殖的作用和标志物Nestin表达;收集龟甲干预海马神经元的上清液作为条件培养基,干预小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),观察对BMSC成骨分化和矿化的作用。结果:(1)动物实验:与模型组比较,龟甲干预组可显著提高小鼠运动总距离(P<0.05),降低静止时间和四周运动时间(P<0.01,P<0.05);增加水迷宫实验中穿越站台次数(P<0.05),降低逃避潜伏期时间(P<0.01);改善模型组小鼠股骨微细结构,增加骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)(P<0.05),降低骨小梁分离度(Tb.Sp)(P<0.01);改善股骨组织形态学,促进成骨细胞表面(Ob.S/BS,P<0.01)和数量(Ob.N/BS,P<0.05),抑制破骨细胞表面(Oc.S/BS,P<0.01)和数量(Oc.N/BS,P<0.05);改善海马组织形态学,增加海马CA3区尼氏体的数量(P<0.05)。(2)细胞实验:龟甲在1μg/mL促进海马神经元细胞增殖(P<0.05)和Nestin蛋白表达(P<0.01)。龟甲干预的海马神经元条件培养基提高了碱性磷酸酶(ALP)染色面积和茜素红(ARS)染色矿化面积(P<0.05)。结论:龟甲能改善自然衰老小鼠骨质疏松症和海马衰老,并且促进海马神经元增殖,其干预后的海马神经元条件培养基能够促进小鼠BMSC成骨分化。