摘要
目的 构建GPR40基因质粒转染PC12细胞,用DHA干预后测定细胞内Ca2+浓度的变化,从而探讨DHA通过GPR40信号途径介导Ca2+上调的作用机制.方法 将PC12细胞分成4组,分别为未转染组.空载体转染组,GPR40基因-pCruz载体转染组及GPR40基因-pCruz载体转染+阻制剂Xestospongin C组;构建大鼠GPR40质粒并转染PC12细胞.采用RT-PCR和Western blot方法 从mRNA和蛋白质水平观察GPR40的表达.DHA(10 μmol/L)干预后,测定细胞内Ca2+浓度.结果 DHA干预后,未转染组和空转染组PC12细胞内Ca2+浓度没有受到明显影响;GPR40基因-pCruz载体转染组细胞内的Ca2+浓度明显增加,且这种作用不受细胞外Ca2+浓度的影响:添加阻滞剂组Ca2+浓度变化也不明显.结论 DHA能动员GPR40基因转染的PC12细胞内Ca2+浓度且这种作用完全能被IP3受体特异性阻止剂Xestospongin C所阻断,提示DHA可能通过GPR40信号途径动员细胞内Ca2+浓度并因此改善神经功能.
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