超低温冷藏对体外培养兔角膜缘上皮细胞活性的影响

作者：许永根; 徐永胜; 王薇

来源：眼科, 2008, (02): 108-112.

• 角膜缘上皮细胞
• 超低温冷藏
• 体外培养
• 细胞活性

目的分析超低温冷藏兔角膜缘上皮细胞活性变化。设计实验性研究。研究对象超低温冷藏兔角膜缘上皮单细胞悬浮液/兔角膜缘上皮单细胞悬浮液。方法采用NIH 3T3饲细胞培养体系,将角膜缘上皮制成单细胞悬浮液后-182℃冷藏1周,复苏后行体外培养。以角膜缘上皮单细胞悬浮液为对照组。通过测定细胞贴壁时间、分裂周期、MTT值、~3H-胸苷值分析细胞代谢和增殖活性,测定单克隆形成率分析干细胞性,采用AE5免疫组织化学方法鉴定培养上皮细胞,HE染色观察培养角膜上皮细胞形态,PAS染色鉴别结膜杯状细胞。主要指标细胞贴壁时间,分裂周期,MTT值,~3H-胸苷值,单克隆形成率及角膜上皮细胞形态等。结果体外培养超低温冷藏、复苏兔角膜缘上皮细胞的细胞贴壁率、分裂周期、单克隆形成分别为(73.16±13.36)%,(25.42±18.73)小时,(13.17±2.87)%,对照组为(74.89±15.72)%,(20.04±9.70)小时,(15.17±3.25)%。细胞代谢、增殖力也较对照组弱(P>0.05)。HE染色示细胞形态、结构无差异,AE5免疫组化染色均为阳性,而PAS染色均为阴性。结论超低温冷藏可降低体外培养兔角膜缘上皮细胞生物学活性,但其影响有限不足以改变细胞生物学特性和在眼表修复中的应用。(眼科,2008,17:108-112)

• 单位
  北京大学第三医院; 北京大学