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摘要
采用毛细管差示扫描量热法,分析Ca2+对嗜热菌Anoxybacillus sp.来源的α-淀粉酶AGXA的热稳定性的影响及其机制。脱气后的蛋白样品和缓冲液,分别加入对应的样品池和缓冲液池中,测量温度为10℃～120℃,升温速率为1℃/min。测量结果中,纵坐标为Cp,横坐标为温度,去折叠变化曲线峰最高点对应的横坐标为蛋白质去折叠温度Tm,去折叠变化曲线与对应温度的积分值为热焓变化值ΔH,范特霍夫焓变化值ΔHv由去折叠变化曲线峰形状决定。根据改进的吉布斯-亥姆霍兹方程计算AGXA的自由能变化值ΔG,绘制AGXA自由能变化与温度关系的稳定性曲线。结果表明:有Ca2+和无Ca2+存在时,AGXA的ΔHv与ΔH的比值都约等于1.0;有Ca2+时,AGXA的Tm、ΔH和ΔCp值,分别为77.8℃、292.5 kcal/mol和2.76 kcal·mol-1·℃-1;无Ca2+时,AGXA的Tm、ΔH和ΔCp值,则分别为67.3℃、238.3 kcal/mol和3.81 kcal·mol-1·℃-1;有Ca2+时的AGXA,其Tm、ΔH值分别比无Ca2+时的高,ΔCp值则比无Ca2+时的低。有Ca2+和无Ca2+的α-淀粉酶AGXA的热变性过程皆为不可逆的双态模式,有Ca2+的AGXA,通过增大ΔH和降低ΔCp的方式提高其热稳定性。研究揭示了Ca2+提高AGXA的热稳定性机制,为进一步扩大该酶的应用提供了理论和实践支撑。
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