基于CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠miR let-7a

作者：周岚; 张生贵; 胡祖梁; 王添贤; 岳鹏鹏; 于鸿浩^*

来源：基础医学与临床, 2022, 42(06): 857-863.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2022.06.023

• miRs
• let-7a
• CRISPR/Cas9
• 基因编辑
• 肿瘤发生

目的 构建靶向小鼠miR let-7a的高效CRISPR/Cas9系统。方法 根据小鼠miR let-7a的两个编码位点let-7a-1和let-7a-2的编码序列各设计了两对dual-sgRNAs导向序列，通过sgRNA表达载体的构建、小鼠N2a细胞的共转染、药物筛选、阳性细胞PCR产物测序以及TA克隆测序分析等实验步骤完成了4对dual-sgRNAs导向序列的打靶效力分析。结果 所构建的4对打靶载体在细胞中发挥了作用，打靶位点均出现了碱基插入或缺失，药物筛选阳性细胞打靶位点RCR产物Sanger法测序峰图在4个靶点位置均有套峰出现。TA克隆测序结果表明本研究设计的4对dual-sgRNAs导向序列的打靶效率分别为42.10%、62.50%、52.63%和47.37%。结论 本研究所设计的4对dual-sgRNAs导向序列均可以有效介导Cas9蛋白切割小鼠miR let-7a,形成突变效应。为后续miR let-7a作用靶点的深入挖掘，阐明其发挥抑癌功能的作用机制提供了依据。

• 单位
  桂林医学院