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摘要
旨在探讨半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)对体外培养燕山绒山羊次级毛囊(SF)生长及毛乳头细胞(DPCs)增殖凋亡的影响。本研究选取1只1周岁左右健康雄性燕山绒山羊皮肤若干，完整分离的次级毛囊随机分成Cys试验组和Met试验组，每组各浓度3个重复，每个重复8根毛囊，Cys试验组添加浓度分别为0、40、80、120、160和200 μg·mL-1；Met试验组添加浓度分别为0、10、15、20、25和30 μg·mL-1。毛囊培养7 d，每隔24 h观察毛囊生长形态并测量毛囊生长长度。从燕山绒山羊次级毛囊中提取、纯化DPCs，细胞计数并绘制DPCs生长曲线，将DPCs随机分为Cys试验组和Met试验组，每组各浓度6个重复，Cys试验组添加浓度分别为0、20、40、60、80、100 μg·mL-1；Met试验组添加浓度分别为0、2、4、6、8、10 μg·mL-1。培养2 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定燕山绒山羊DPCs中Cys和Met的最适培养浓度，利用qRT-PCR技术检测不同浓度Cys和Met的DPCs增殖相关基因(PCNA、CCND1、CDC42、CDK4)、凋亡相关基因(P21、P53、Bax、Caspase-3、Bcl-2)、皮肤细胞分化相关基因(IVL)及角蛋白相关基因(K10、K14)mRNA表达水平。与对照组相比，添加80和120 μg·mL-1 Cys与10、15、20和25 μg·mL-1 Met均可显著影响次级毛囊生长速率和累计生长长度(P < 0.01)，且120 μg·mL-1 Cys和20 μg·mL-1 Met促生长效果最好；添加20、40和60 μg·mL-1 Cys可以显著影响DPCs增殖(P < 0.05)，添加40 μg·mL-1Cys显著上调PCNA、CCND1、CDK4、Bcl-2、K10、K14和IVL基因mRNA表达量；添加6 μg·mL-1 Met可以显著影响DPCs增殖(P < 0.05)，并显著上调PCNA、CCND1、CDK4、P21、Bcl-2、K10和K14基因mRNA表达量。综上，添加Cys和Met可以显著促进长绒期燕山绒山羊次级毛囊生长，最适添加量分别为120 μg·mL-1和20 μg·mL-1；添加Cys和Met可通过上调细胞增殖、分化、角蛋白等基因mRNA、下调细胞凋亡基因mRNA表达，促进乳头细胞增殖、抑制细胞凋亡进而促进燕山绒山羊次级毛囊生长。
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单位河北农业大学; 动物科技学院
