HA和NA匹配度对H5亚型高致病性禽流感假病毒影响的研究

作者：李涵冰; 李树东; 常小艳; 杨学莲; 侯喜林; 王桂芹; 余丽芸^*

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(07): 665-671.

• H5亚型高致病性禽流感病毒
• 假病毒
• HA
• NA

为研究不同H5亚型高致病性禽流感病毒(H5 HPAIV)的HA和NA匹配度对流感假病毒组装和功能的影响，本研究将5株H5 HPAIV的HA和NA基因节段分别克隆于pCMV/R载体，构建3个HA和5个NA重组质粒，两两随机组合后将HA、NA质粒与pCMV/RΔ8.9质粒、p HR-CMV-Luc质粒构成4质粒系统，利用磷酸钙法将4个质粒转染HEK293T细胞，检测各细胞培养上清液血凝效价，结果显示：有3个上清液无血凝效价，其余12个上清液的血凝效价在100 HAU/m L～400 HAU/m L，表明获得12株具有血凝效价的流感假病毒。超速离心后获得浓缩假病毒，通过western blot检测假病毒HA蛋白的表达，结果显示各假病毒均在75 ku、50 ku和25 ku有特异性条带。利用各假病毒分别感染MDCK.1细胞60 h后裂解细胞，采用荧光素酶试验检测假病毒的相对荧光素酶活性(RLA)，结果显示各假病毒RLA在5.0×101～4.5×105不等。上述结果首次表明不同H5 HPAIV的HA和NA相互匹配会对假病毒的血凝效价和相对荧光酶活性(RLA)造成影响。本研究为后续流感病毒灭活疫苗制备及抗病毒药物的研发奠定基础。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 高等研究院