肿瘤靶向治疗活性人羧肽酶A1最适片段的分析和克隆

作者：郑佩婵; 马越云; 卢雪涛; 岳乔红; 周珊; 王丽华; 郭旭光; 曾宪飞; 郝晓柯

来源：中华肿瘤防治杂志, 2010, (13): 986-990.

• 前列腺肿瘤
• 抗体导向酶前体药物疗法
• 人羧肽酶A1
• 活性短片段
• 原核表达 prostatic neoplasms
• antibody-directed enzyme prodrug therapy
• human carboxypetidase A1
• active center fragment
• prokaryotic expression

目的:获得肿瘤靶向治疗用活性人羧肽酶A1(hCPA1)的最适片段。方法:计算机分析hCPA1活性相关氨基酸,PCR扩增选择最适基因片段,克隆入PQE-80载体,转化Rosetta gami2(DE3)进行表达,与hCPA1活性中心片段比较酶活性。结果:PCR成功扩增了hCPA1活性中心和hCPA1活性短片段基因,酶切鉴定和测序均证实重组表达载体构建成功,表达的蛋白以SDS-PAGE分析,分别在约25×103和20×103处出现新生蛋白条带,蛋白质印迹法实验证实了新生蛋白为目的蛋白。Hippuryl-L-Phenylalanin(H-L-P)实验显示两者均具有羧肽酶活性,且hCPA1活性短片段的...

• 单位
  第四军医大学; 西京医院