K亚群禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

作者：袁丽霞; 饶明章; 张杰; 赵子君; 陈建; 陈杨一骏; 严立福; 郑晓翠; 谢暮晴; 曹伟胜

来源：中国兽医科学, 2017, 47(11): 1349-1356.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.11.002

• K亚群禽白血病病毒
• gp85蛋白
• 原核表达
• 间接ELISA

为了研究K亚群禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法,以ALV-K GDFX0603株为模板,扩增其gp85基因,构建原核表达质粒p ET-GDFX0603-gp85,筛选原核表达菌液的诱导条件,采用Ni柱纯化表达的重组蛋白;以纯化后重组蛋白作为包被抗原,研究ALV-K抗体间接ELISA检测方法。结果显示,表达的gp85重组蛋白以包涵体形式存在,大小为53 ku。Western-blot分析表明,该蛋白具有良好的免疫反应性;重复性试验结果显示,板内重复性的CV最大值为10.41%;板间重复性的CV最大值为12.57%,CV值均小于15%。特异性试验结果显示,该方法除了对ALV-A阳性血清有弱的交叉反应外,对ALV-B、ALV-J、AIV、NDV、IBDV、MDV、REV、大肠杆菌和沙门菌的阳性血清均无交叉反应。结果表明,初步建立了检测ALV-K抗体的间接ELISA方法,该方法具有良好的板内和板间重复性及较强的特异性。

• 单位
  华南农业大学; 农业部