山柰酚抑制NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡提高脓毒症小鼠生存率

作者：吴森泉; 方年新; 莫伟良; 张平^*

来源：新发传染病电子杂志, 2022, 7(01): 12-16.

DOI：10.19871/j.cnki.xfcrbzz.2022.01.003

• 山柰酚
• 炎症小体
• 细胞焦亡
• 蛋白激酶A
• 脓毒症

目的 本研究以脂多糖(LPS)刺激的小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)建立细胞炎症模型，探讨山柰酚对三磷酸腺苷(ATP)诱导的炎症小体活化、细胞焦亡的影响及其作用机制，以及对脓毒症小鼠生存率的影响。方法 提取6～7周龄C57BL/6雌性小鼠原代骨髓细胞并诱导其分化为骨髓来源的巨噬细胞，根据实验设计分为空白对照组、LPS处理组、单纯药物处理组、LPS+ATP(阳性模型组)、阳性模型加药组(3个药物浓度)，通过LPS+ATP处理诱导NLRP3炎症小体的活化；采用蛋白质印迹法检测caspase-1、IL-1β、gasdermin D(GSDMD)等蛋白的活化水平；采用细胞形珠阵列(CBA)检测细胞培养上清液中IL-1β的水平；碘化丙锭(PI)染色法检测细胞死亡/细胞焦亡；加入蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89后再次检测以上炎症小体活化与焦亡的指标。盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症小鼠模型。结果 山柰酚能够抑制LPS+ATP处理后巨噬细胞中caspase-1p20和成熟IL-1β释放至细胞培养上清中；同时，山柰酚也能明显抑制巨噬细胞中具有活性的GSDMD-NT的形成以及细胞焦亡。另外，H89预处理可逆转山柰酚对LPS+ATP诱导的caspase-1p20和成熟IL-1β的释放的抑制作用，并且具有明显逆转山柰酚对ATP诱导细胞焦亡的抑制作用。通过盲肠结扎穿孔术建立脓毒症小鼠模型，山柰酚灌胃处理能够有效的延缓感染后小鼠的死亡。结论 山柰酚可能通过促进PKA活性而抑制NLRP3炎症小体活化与细胞焦亡，从而提高脓毒症小鼠的生存率。

• 单位
  东莞市人民医院