丝状支原体山羊亚种LppA蛋白N末端基因真核表达载体构建及小鼠免疫效果分析

作者：尹德晶; 吴燕; 岳筠; 杨鹏; 陈静; 王慧; 张双翔; 王开功^*; 程振涛^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(03): 847-856.

• 丝状支原体山羊亚种
• LppA蛋白
• DNA疫苗
• 免疫效果

基于丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc)贵州株的LppA蛋白N末端基因，构建真核重组表达质粒pVAX1-LppA,并对免疫效果进行分析，为防控羊支原体肺炎提供新思路。以构建的真核重组表达质粒pVAX1-LppA(50、100、150μg)、pVAX1空载体、无菌PBS分别免疫小鼠。通过ELISA方法检测小鼠血清中抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)水平，MTT法检测脾淋巴细胞增殖情况，流式细胞术检测CD4+、CD8+ T淋巴细胞占总细胞数比例的变化，攻毒试验评估对小鼠的保护效率，并采集小鼠肺制备切片以观察病理变化。结果显示：与空载体pVAX1组及PBS对照组相比，重组质粒pVAX1-LppA组小鼠体内的抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)水平显著升高，脾细胞增殖能力更强，CD4+、CD8+ T淋巴细胞占总细胞数的比例显著增多，对小鼠具有一定的攻毒保护能力，肺部病理损伤明显减轻，发病动物数量减少，其中100μg的重组质粒pVAX1-LppA保护率最高，为80%。综上表明，LppA蛋白具有良好的免疫原性，重组质粒pVAX1-LppA能激活强烈的体液免疫和细胞免疫应答，可作为羊支原体肺炎的候选疫苗。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学