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摘要
目的探究异丙安替比林(Propyphenazone)对人肾癌细胞Caki-1增殖抑制和凋亡的影响及其分子机制。方法使用MTT(四甲基偶氮唑盐)法和克隆形成抑制实验检测异丙安替比林在不同时间和浓度下对Caki-1细胞增殖能力的影响; Annexin V-FITC/PI双染色检测对Caki-1细胞凋亡的影响; Hoechst 33342染色法检测Caki-1细胞染色质固缩状态;蛋白质印迹法(Western Blot)检测Caki-1细胞的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(蛋白激酶B)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶p-AKT以及DNA修复酶PARP蛋白表达变化;激光共聚焦显微镜检测LC3蛋白在细胞中的点状聚集。结果 MTT实验结果表明异丙安替比林可抑制人肾癌细胞Caki-1的增殖(P<0.05),同时,异丙安替比林分别处理24 h、48 h、72 h后,所对应的半抑制浓度(IC50)分别为105μM、83μM、56μM;同时,克隆形成抑制实验表明20μM和40μM的异丙安替比林处理Caki-1细胞后,克隆形成率分别降为38%(P<0.05)和20%(P<0.01);流式结果表明,当使用0μM、40μM、80μM和100μM的异丙安替林处理Caki-1细胞后,细胞凋亡率分别为7.4%、13.5%、34.5%和50.9%; Western Blot结果表明,随着异丙安替比林浓度的增加,p-AKT蛋白表达降低,并伴随DNA修复酶PARP失活。免疫荧光实验结果表明异丙安替比林可能诱导细胞发生自噬。结论异丙安替比林显著抑制人肾癌Caki-1细胞增殖,并通过抑制AKT通路诱导肾癌细胞发生凋亡和自噬。
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