基于外泌体蛋白质组学探讨叶酸缺乏对N2a-APP细胞β-淀粉样蛋白的影响

作者：樊珺婷; 董翠霞; 黄丽; 张美琳; 刘欢^*

来源：中国神经精神疾病杂志, 2022, 48(08): 475-481.

• 叶酸缺乏
• β-淀粉样蛋白
• 外泌体
• N2a-APP细胞
• 蛋白质组学
• 自噬
• 阿尔茨海默病

目的 观察叶酸缺乏对N2a-APP细胞β-淀粉样蛋白（amyloid-β, Aβ）、外泌体数量的影响，利用外泌体蛋白质组学探讨叶酸缺乏影响神经细胞外泌体分泌的可能分子机制。方法 体外培养N2a-APP细胞，根据有无叶酸添加，分成叶酸缺乏（folic acid deficiency, FD）组（0μmol/L）和叶酸正常（folic acid normal, FN）组（10μmol/L）。采用酶联免疫吸附法测定检测细胞内外Aβ1-40和Aβ1-42水平；试剂盒提取细胞培养液外泌体；电镜观察、粒径分析鉴定外泌体；Western blot检测外泌体标志蛋白及细胞内自噬相关蛋白；非标记定量技术检测外泌体蛋白质组变化，进行生物信息学分析。结果 FD组N2a-APP细胞内外Aβ1-40和Aβ1-42水平高于FN组（P<0.05）。两组N2a-APP细胞分泌的物质均呈现外泌体典型结构，表达外泌体标志蛋白CD36和Flotillin-1。FD组外泌体蛋白浓度高于FN组[（637.56±47.31）μg/mL vs.(365.76±76.21)μg/mL,P<0.001]。蛋白质组学结果显示，FD组与FN组间有50种蛋白差异表达，其中FD组细胞分泌的外泌体内14种蛋白表达下降，36种蛋白表达增加。FD组细胞内自噬相关蛋白Beclin-1(1.33±0.11 vs. 0.88±0.13)、LC3Ⅱ/Ⅰ(0.55±0.08 vs. 0.40±0.04)表达高于FN组，p62(0.88±0.07 vs. 1.27±0.16)低于FN组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 叶酸缺乏可影响N2a-APP细胞自噬水平、外泌体的分泌数量及内容物，增加细胞内外Aβ水平。

• 单位
  天津医科大学; 公共卫生学院