补阳还五汤黄芪不同配比组方调控平滑肌细胞增殖及迁移抑制动脉粥样硬化的分子机制

作者：李娟; 王静依; 周欣欣; 高雅; 刘建春; 曾群; 董秋菊; 郭春兰; 马存根; 张红珍^*

来源：中华中医药学刊, 2023, 41(11): 138-288.

DOI：10.13193/j.issn.1673-7717.2023.11.029

• 补阳还五汤
• 动脉粥样硬化
• 黄芪不同配比组方
• 血管平滑肌细胞
• 氧化型低密度脂蛋白
• Rho/ROCK信号通路

目的 观察补阳还五汤(BYHWD)黄芪不同配比组方通过调控Rho/ROCK信号通路对氧化型低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein, ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)增殖和迁移的影响，以明确黄芪最佳配比剂量。方法 将大鼠主动脉血管平滑肌(A10)细胞分为空白对照组、模型对照组、BYHWD黄芪低剂量组(黄芪30 g)、BYHWD黄芪中剂量组(黄芪60 g)、BYHWD黄芪高剂量组(黄芪90 g)、BYHWD黄芪超高剂量组(黄芪120 g)、辛伐他汀组。除空白对照组外，其他治疗组均在ox-LDL刺激后予以BYHWD黄芪低、中、高、超高剂量含药血清和辛伐他汀血清干预。通过CCK-8法检测补阳还五汤黄芪不同组方和辛伐他汀对ox-LDL诱导的平滑肌细胞增殖的影响；细胞划痕愈合实验检测各组细胞增殖和迁移的情况；同时采用免疫荧光染色法检测增殖蛋白Ki67的表达；蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule, VCAM-1)、细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecules, ICAM-1)、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)、p-肌球蛋白轻链(P-MLC)蛋白相对表达水平。结果 CCK-8和细胞划痕愈合实验结果显示，与模型对照组相比补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组和辛伐他汀含药血清干预后，细胞的增殖和迁移明显受到抑制(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示黄芪低、中、高、超高剂量组Ki67阳性细胞数量明显减少(P<0.05),其中黄芪120 g的治疗效果明显优于其他治疗组(P<0.05);Western Blot结果显示，与正常对照组相比，ox-LDL诱导后模型组细胞VCAM-1、ICAM-1、ROCK1、ROCK2、P-MLC蛋白的表达量明显增多，经过补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量和辛伐他汀含药血清干预后，各组细胞VCAM-1、ICAM-1、ROCK1、ROCK2、P-MLC蛋白的表达量明显降低(P<0.05),补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组各组间比较，黄芪超高剂量组(黄芪120 g)的蛋白表达水平明显少于其他黄芪不同配比组方各组(P<0.05)。结论 补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组可能抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌(A10)细胞的增殖和迁移，下调VCAM-1、ICAM-1蛋白表达量，抑制ROCK信号通路，从而发挥预防和治疗动脉粥样硬化的作用，其中补阳还五汤黄芪超高剂量组(黄芪120 g)的治疗效果最优。

• 单位
  大同大学; 山西中医药大学; 国家中医药管理局