起搏基因体外调控骨髓间充质干细胞分化为类起搏细胞的研究

作者：牛萍; 张端莲; 赵月强; 黄星原

来源：中国组织化学与细胞化学杂志, 2010, (05): 488-493.

• 起搏
• 基因转染
• 间充质干细胞 Pacemaker
• Gene transfection
• Mesenchymal stem cells(MSCs)

目的本研究旨在通过体外构建起搏基因质粒pIRES2-EGFP-HCN2,电穿孔转染骨髓间充质干细胞,检测其在体外的表达情况。方法对含mHCN2 cDNA的PTR载体进行转化和扩增,将所得mHCN2基因定向克隆到含有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pIRES2-EGFP中,进行双酶切来鉴定克隆的正确性。将重组质粒及空白质粒用电穿孔法转染骨髓间充质干细胞,并在体外与心肌细胞共培养,观察搏动频率变化及mHCN2的表达,并检测其电生理和组织学特征。结果构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2。荧光显微镜下可见转染后的骨髓间充质干细胞呈绿色荧光,细胞中mHCN2的阳性表达率为98.2%。免疫荧光显...

• 单位
  武汉大学; 武汉大学人民医院