大菱鲆TLR14基因的克隆和相关功能研究

作者：孙莹; 李松; 胡国斌^*

来源：中国海洋大学学报(自然科学版), 2022, 52(07): 49-61.

DOI：10.16441/j.cnki.hdxb.20210234

• TLR14基因
• 大菱鲆
• 基因克隆
• 表达模式
• 亚细胞定位
• 过表达
• 天然免疫

Toll样受体14(Toll-like receptor 14,TLR14)存在于非哺乳动物中，是先天性免疫系统中的模式识别受体。为探究大菱鲆(Scophthalmus maximus) TLR14的免疫功能，本研究克隆了大菱鲆TLR14基因(SmTLR14),研究了其免疫应答表达、蛋白质亚细胞定位和对免疫相关基因表达的影响。研究表明：SmTLR14基因长度为12 708 bp,具有4个外显子和3个内含子，编码877个氨基酸。预测的蛋白含有1个信号肽序列，23个LRR结构域，1个跨膜结构域和1个TIR结构域(含有3个保守的box结构)。系统进化树显示，大菱鲆TLR14和牙鲆的TLR14具有最高的相似性。组织表达分析显示，SmTLR14在所有被检测的大菱鲆组织中均表达，其中在脾脏中表达量最高。脂多糖刺激后，SmTLR14在免疫组织(鳃、头肾、脾脏)中的表达被显著上调，而肽聚糖刺激后，其在各组织的表达变化不明显或被显著抑制。亚细胞定位显示，大菱鲆TLR14蛋白定位在大菱鲆肾细胞的细胞质中。用脂多糖刺激过表达SmTLR14的TK细胞，发现炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-8的表达量被显著上调，而抗病毒因子IFN-1、IRF-1和IRF-3的表达量只轻微上调。研究结果表明，SmTLR14在大菱鲆抗菌免疫中发挥着重要作用。

• 单位
  中国海洋大学; 生命学院