超声微泡介导的膀胱癌抑制因子miR-490-5p调控转录因子ZEB1对膀胱癌细胞的影响研究

作者：曾皓; 杨鑫荣^*; 龚化

来源：中国医学装备, 2023, 20(01): 146-152.

• 膀胱癌
• 超声微泡
• 微小核糖核酸(miR)-490-5p
• 锌指E-盒结合同源盒蛋白1
• 增殖
• 侵袭
• 迁移

目的：探究微泡介导的膀胱癌抑制因子微小核糖核酸(miR)-490-5p调控锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：检测人膀胱上皮细胞.人膀胱癌细胞VM-CUB-3、639V和5637、HT-1197细胞中mi R-490-5p和ZEB1 mRNA与蛋白的表达情况。选择人膀胱癌639V细胞株进行实验，对639V细胞给予1%、5%、10%、20%浓度水平的微泡以及超声强度为0.5 W/cm2、0.75 W/cm2的超声照射30 s处理，筛选超声强度为0.5 W/cm2、微泡浓度为10%；将常规培养639V细胞纳入对照组，将培养及微泡制备后的639V细胞分别纳入超声微泡组、超声微泡转染miR-490-5p组、脂质体转染miR-490-5p组及超声微泡转染miR-490-5p+ZEB1组，分别检测5组639V细胞增殖抑制率、侵袭细胞数及划痕愈合率，并用Westernblot法检测5组639V细胞ZEB1、增殖细胞核抗原(PCNA)、钙黏蛋白E(E-cad)和钙黏蛋白N(N-cad)水平。结果：膀胱癌VM-CUB-3、639V、5637和HT-1197细胞与人膀胱上皮细胞相比，miR-490-5p水平降低，ZEB1mRNA和ZEB1蛋白水平均升高，其中639V细胞差异最明显。在超声0.5 W/cm2、微泡浓度10%的处理条件下，超声微泡组细胞增殖抑制率和E-cad蛋白均高于对照组，差异有统计学意义(t=22.282,t=4.517;P<0.05),PCNA蛋白水平、侵袭细胞数和N-cad蛋白和划痕愈合率降低，差异有统计学意义(t=2.441,t=2.325,t=4.572,t=4.417;P<0.05)；超声微泡转染miR-490-5p组、脂质体转染miR-490-5p组细胞增殖抑制率、E-cad蛋白高于超声微泡组，差异有统计学意义(t细胞增殖抑制率=16.902,t=12.426;tE-cad=5.586,t=2.765;P<0.05);PCNA蛋白水平、侵袭细胞数、N-cad蛋白和划痕愈合率低于超声微泡组，差异有统计学意义(tPCNA蛋白水平=7.530,t=4.164;t侵袭细胞数=9.007,t=5.682;tN-cad蛋白=8.089,t=4.297;t划痕愈合率=11.366,t=6.665,P<0.05)。超声微泡转染miR-490-5p+ZEB1组细胞增殖抑制率、E-cad蛋白低于超声微泡转染miR-490-5p组，差异有统计学意义(t=2.903,t=6.114,P<0.05),PCNA蛋白水平、侵袭细胞数、N-cad蛋白和划痕愈合率高于超声微泡转染miR-490-5p组，差异有统计学意义(t=6.586,t=4.487,t=5.695,t=4.603,P<0.05)；双荧光素酶报告基因显示miR-490-5p与ZEB1存在靶向关系。结论：超声微泡介导的miR-490-5p可能通过负向调控ZEB1，抑制人膀胱癌细胞639V增殖、侵袭及迁移，超声微泡介导是一种行之有效的转染方式。