基于上转发光和量子点免疫层析技术的牛免疫球蛋白G检测方法的研究与评价

作者：孟凡伟; 张悦; 田胜男; 孙崇思; 胡秋实; 王晓芳^*; 周蕾^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2023, (23): 58-63.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.09.0004

• 牛
• 免疫球蛋白G(IgG)
• 上转换发光颗粒
• 量子点
• 免疫层析
• 双抗体夹心法
• 双抗原竞争法

为了建立一种快速检测牛免疫球蛋白G(IgG)的方法，试验从牛血清中提取和纯化IgG,用微量紫外分光光度计检测浓度，并每2周1次、分4次用牛IgG分别免疫2只大耳白兔制备兔抗牛IgG多克隆抗体，用酶联免疫吸附试验检测抗体效价。分别以上转发光颗粒(UPT)和量子点(QD)作为生物示踪物，结合双抗体夹心法和双抗原竞争法原理制备4种试纸条，分别为UPT-LF-夹心法、UPT-LF-竞争法、QD-LF-夹心法和QD-LF-竞争法试剂条；4种试纸条层析膜质控带均为2 mg/mL羊抗兔抗体，夹心法和竞争法检测带分别为3 mg/mL兔抗牛IgG多克隆抗体和2 mg/mL牛IgG;配制0,0.1,0.3,0.5,0.7,1,3,5,7,10,30,50,70,100μg/mL浓度的牛IgG标准品，分别用4种试纸条进行检测，对试纸条的检出限、线性和精密性进行研究，筛选最优试纸条。用筛选到的最优试纸条和折光仪同时检测52份乳样中牛IgG含量，并抽取7份乳样用液相色谱进行检测。结果表明：提取的牛IgG浓度为67.6 mg/mL,2份血清中兔抗牛IgG多克隆抗体浓度分别为34 mg/mL和70 mg/mL,兔抗牛IgG多克隆抗体效价均为1∶102 400。UPT-LF-夹心法、UPT-LF-竞争法、QD-LF-夹心法和QD-LF-竞争法试纸条的检出限分别为0.3,3.0,0.1,0.5μg/mL,线性拟合的相关系数(R2)分别为0.976,0.990,0.945,0.974,4种试纸条的精密性由大到小依次为UPT-LF-夹心法、UPT-LF-竞争法、QD-LF-夹心法和QD-LF-竞争法，QD-LF-竞争法试纸条为最优的试纸条。折光仪和QD-LF-竞争法试纸条检测50份牛初乳样中牛IgG含量分别为20～80 mg/mL和50～230 mg/mL。7份乳样的QD-LF-竞争法试纸条与液相色谱检测牛IgG含量的相关性高达0.975 9,而折光仪与液相色谱检测牛IgG含量的相关性仅为0.827 4。说明与折光仪相比，QD-LF-竞争法试纸条检测牛IgG含量的准确性更高。

• 单位
  中国科学院过程工程研究所; 河北省畜牧兽医研究所