疑似蛇毒液样品的纳升级超高效液相色谱-高分辨质谱分析鉴定

作者：李泽华; 王闯; 徐斌; 陈佳; 张瑛; 郭磊^*; 谢剑炜

来源：色谱, 2023, 41(02): 122-130.

• 纳升级超高效液相色谱
• 高分辨质谱
• 蛇毒
• 蛋白质组学
• 平行反应监测

针对5个疑似蛇毒毒液及其沾染样品，基于纳升级超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(Nano LC-MS/HRMS)技术，结合尺寸排阻色谱分离，建立了一种蛋白质种类及物种归属的严格鉴定方法。5个样品经尺寸排阻色谱分离后均得到3个洗脱峰，分别冻干后以胰蛋白酶进行溶液内酶解处理并进行液相色谱-高分辨质谱分析鉴定。首先采用全扫描-数据依赖型MS/MS(Full MS/dd MS2)采集模式对样品中的肽段信息进行非靶向采集，依次与Swiss-Prot、蛇亚目(Serpentes)、游蛇科(Colubroidea)、眼镜蛇科(Elapidae)、眼镜蛇亚科(Elapinae)、眼镜蛇属(Naja)蛋白质数据库逐级收缩比对；再筛选符合肽谱匹配度、肽段错误发现率小于1%和特征肽段数目大于等于2的蛋白质，共鉴定到32种蛋白质均来自中华眼镜蛇(Naja atra),可归属于Naja atra的10个家族，主要为三指毒素、金属蛋白酶、磷脂酶A2等。最后，采用平行反应监测模式选取每种蛋白质的两条特征肽段进行靶向验证，当两条特征肽段均满足“至少75%的y+和b+离子的Δm/z小于5 ppm”时，方认为鉴定到了样品中的某一蛋白质。最终鉴定出5个样品均含有Naja atra蛇毒。此鉴定方法研究系统、严格，可为蛇毒中毒司法鉴定以及蛇毒药物研究等提供有效的技术支持。

• 单位
  药物研究所; 中央民族大学