牛病毒性腹泻/黏膜病病毒荧光定量PCR检测方法的建立

作者：张康; 郭志廷; 仇正英; 张景艳; 王磊; 张凯; 王贵波; 梁芬芬; 马倩^*; 李建喜^*

来源：福建农业学报, 2021, 36(09): 1042-1047.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2021.09.007

• 牛病毒性腹泻病毒
• 5′UTR
• 实时荧光定量PCR
• RNA标准品

【目的】设计一种能够快速检测出牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)的方法。【方法】依据GenBank公布的BVDV 5′UTR基因属于特异性保守区域的前提,构建具有特异性的探针和引物,以体外转录病毒RNA作为绝对定量标准品。对荧光定量RT-PCR方法的各反应条件进行优化,创建BVDV荧光定量PCR检测方法。【结果】5.026 7 copies·μL-1是此检测方法的最低下限值,该方法拥有良好的重复性,变异系数在组内、组间均<1%。特异性较高,对其他病毒核酸的扩增均为阴性,如猪瘟病毒、口蹄疫病毒等。【结论】建立的BVDV荧光定量PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为牛病毒性腹泻的早期诊断提供了重要的技术支撑。

• 单位
  甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所