小胶质细胞的嘌呤受体在脉络膜新生血管小鼠热损伤模型中的表达

作者：李璐; 刘珏君; 许阿敏; 陈长征^*; Nicole ETER

来源：眼科新进展, 2021, 41(02): 105-109.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2021.0022

• 嘌呤受体
• 抑制剂
• 脉络膜新生血管
• 小胶质细胞

目的研究小胶质细胞的嘌呤受体(P2)在脉络膜新生血管(CNV)形成中的作用及其抑制剂磷酸吡哆醛-6-偶氮(苯-2,4-二磺酸)四钠盐水合物(PPADS)对小胶质细胞的功能和CNV形成的影响。方法选取6～8周龄C57BL/6J小鼠25只,随机分为正常对照组(5只)和模型组(20只),模型组小鼠均制作激光诱导CNV模型,模型组小鼠在激光后第1、4、7、14天处死并取材视网膜和脉络膜组织。选取CX3CR1GFP/+基因敲除小鼠15只,制作激光诱导CNV模型后随机分为3组,第1组和第2组分别于激光后在玻璃体内立即注射2μL PPADS(PPADS注射组)或磷酸盐缓冲液(PBS对照组),第3组在激光后每天一次PPADS局部滴眼(PPADS眼药组),共3 d。CX3CR1GFP/+小鼠于激光后第4天麻醉后行视网膜自发荧光和荧光素眼底血管造影(FFA)检查后处死取材视网膜。各组小鼠取材后分别进行免疫荧光化学染色和实时荧光定量PCR检测P2受体(P2X4、P2X7、P2Y2和P2Y12)的表达。结果激光诱导CNV形成后,局部激活的小胶质细胞可表达P2受体(P2X4、P2X7、P2Y2和P2Y12)。与正常对照组相比,P2X4、P2X7、P2Y2、P2Y12 mRNA表达量在激光损伤后第1天即可增加,第4天达峰值(t=6.05、2.95、3.67、5.98,均为P<0.01);随后渐下降,至第14天时,仅有极少量激活的小胶质细胞表达目标受体。PPADS抑制P2受体后,与PBS对照组P2X4、P2X7、P2Y2和P2Y12受体mRNA的含量相比,PPADS注射组(t=5.54、9.82、3.86、7.91,均为P<0.01)和PPADS眼药组(t=3.24、5.89、6.75、4.97,均为P<0.01)均明显下降。与PBS对照组相比,PPADS眼药组与PPADS注射组的小胶质细胞的自发荧光强度均明显减弱(均为P<0.01),与PBS对照组相比,PPADS注射组和PPADS眼药组CNV渗漏荧光强度均明显减少(均为P<0.01)。但在PPADS注射组和PPADS眼药组之间,CNV荧光渗漏强度差异无统计学意义(P=0.864)。结论激光诱导CNV形成后,局部激活的小胶质细胞可表达P2受体,P2受体抑制剂PPADS可显著影响小胶质细胞的功能,并抑制CNV的形成。

• 单位
  武汉大学人民医院