摘要
Sirt2对雌性动物的生殖具有重要调节作用,实验旨在探讨小干扰RNA(siRNA)干扰颗粒细胞Sirt2表达后,对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及抗氧化能力的影响。首先利用免疫荧光染色检测FSHR以鉴定颗粒细胞纯度,qRT-PCR检测干扰效率,随后利用MTT法检测干扰Sirt2表达后对细胞增殖的影响,最后利用qRT-PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2及抗氧化相关基因FoxO3a、SOD2、CAT、GPX4的表达,利用DCFH-DA探针检测活性氧(ROS)水平。结果显示:10 nmol/L si-Sirt2转染颗粒细胞24 h后能抑制Sirt2的表达(P<0.05),且对细胞增殖无显著性影响;干扰Sirt2表达后可促进促凋亡基因Caspase3和Bax的表达(P<0.05)、抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达(P<0.05),提高细胞内ROS水平并降低抗氧化相关基因FoxO3a、SOD2、CAT、GPX4的表达(P<0.05)。因此,干扰绵羊颗粒细胞Sirt2表达不会影响细胞增殖,但会促进细胞凋亡并对细胞抗氧化能力产生不利影响。
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单位动物科技学院; 河北农业大学