科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 观察莪术醇对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖的影响,并初步探讨其机制。方法 对数期人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,噻唑兰(MTT)法检测不同莪术醇干预浓度下细胞生长曲线;另分为对照组、A组、B组、C组、P组,每组3个复孔,A、B、C组分别用终浓度分别为2.5、5、10mg·mL-1的莪术醇干预;P组给予5μmol·L-1顺铂。观察干预48 h后细胞形态学变化;采用台盼蓝染色法检测干预48 h后细胞计数及细胞群体倍增时间(TD);采用MTT法检测并对比A、B、C组及P组干预24、48、72 h时细胞增殖抑制率,平皿克隆形成实验观察各组细胞生长情况;分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和蛋白印迹法检测并对比干预48 h时增殖细胞抗原(PCNA)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(p27) mRNA和蛋白表达情况。结果 2.5～10mg·mL-1的莪术醇干预下细胞增殖抑制率呈升高改变,但20～80mg·mL-1的莪术醇干预下细胞增殖抑制率无明显变化;倒置相差显微镜下观察,对照组细胞形态、贴壁生长状况均正常,A、B、C组及P组细胞明显团缩,细胞间隙增大,贴壁细胞不同程度脱落,C组脱落最为明显;A、B、C组及P组细胞内空泡增多,部分可见细胞质染色加深,细胞核浓缩深染呈凋亡形态,C组最严重。48 h细胞计数及TD比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,A、B、C组及P组48 h细胞计数均较少,TD均延长(P<0.05);与A组相比,B、C组及P组48 h细胞计数均较少,TD均延长(P<0.05);与B组相比,C组48 h细胞计数较少(P<0.05),TD延长(P<0.05),P组与B组差异均无统计学意义(P>0.05)。24 h细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05),48h、72h组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且C组>B组/P组>A组,各组细胞增殖抑制率均随着时间的延长呈增高趋势(P<0.05);平皿克隆形成实验显示C组细胞克隆数目明显少于其余各组(P<0.05),且莪术醇对细胞的半数抑制浓度(IC50)值为9.85mg·mL-1;PCNA、p27 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,A、B、C组及P组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05);与A组相比,B、C组及P组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05);与B组相比,C组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05),P组与B组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 莪术醇可抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖,可能与下调PCNA mRNA和蛋白表达、上调p27 mRNA和蛋白表达有关。
-
单位恩施土家族苗族自治州中心医院
