肾阳虚大鼠血清对OB-OC共育体系中β-catenin/OPG/RANKL表达的影响及淫羊藿苷的调控作用

作者：李威; 杨文龙; 夏汉庭; 曹端广; 杨佛; 刘璞; 刘江源; 罗云丰; 杨智军; 杨凤云^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2020, 26(13): 118-124.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20201341

• 中医证型
• 肾阳虚大鼠血清
• 诱导
• 骨质疏松症
• 成骨细胞(OB)与破骨细胞(OC)共育体系

目的:观察肾阳虚大鼠血清对共育体系中骨保护素(OPG),胞质蛋白(β-catenin)及核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的影响及淫羊藿苷对其的调控,进一步探究其诱导骨质疏松发生的可能机制。方法:取16只雄性SD大鼠,随机分为空白组和模型组,每组8只,模型组以10 mL·kg-1腺嘌呤灌胃建立肾阳虚模型,造模成功后收集血清。体外分离培养成骨细胞(OB)和破骨细胞(OC),采用茜素红、碱性磷酸酶(ALP)及姬姆萨染色观察并鉴定OB,OC用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定,transwell小室建立OB-OC共育体系,设置淫羊藿苷组(100μmol·L-1),空白组,淫羊藿苷(100μmol·L-1)+血清组(10%肾阳虚血清),血清组(10%肾阳虚血清)及Dickkopf1(DKK-1)药物组(100μg·L-1),干预共育体系2 d后,对OC进行计数,微板酶标法检测培养液中TRAP及ALP的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组OPG,β-catenin及RANKL蛋白的表达。结果:与空白组比较,血清组ALP活性,β-catenin及OPG蛋白表达均明显降低(P<0. 05),而OC数量,TRAP活性及RANKL蛋白的表达明显升高(P<0. 05);与血清组比较,淫羊藿苷组ALP活性显著降低(P<0. 01),与淫羊藿苷组比较,淫羊藿苷+血清组ALP活性及OPG蛋白表达明显降低(P<0. 05),TRAP活性及RANKL表达明显升高(P<0. 05)。结论:肾阳虚大鼠血清能诱导骨质疏松的发病,其作用机制可能是通过降低ALP活性,下调OPG及β-catenin蛋白的表达,同时提高TRAP活性,上调RANKL蛋白的表达来实现的。

• 单位
  江西中医药大学附属医院; 江西中医药大学