自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

作者：张玲; 王一翔; 易玲娜; 黄鼎宇; 张宇倩; 库努都孜阿依·米尔卡米; 程意; 任全龙

来源：卫生研究, 2023, 52(03): 489-496.

DOI：10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2023.03.025

• 镉
• 小鼠
• 初级精母细胞
• 自噬通量
• 凋亡

目的 探究自噬在氯化镉（cadmium chloride, CdCl2）诱导小鼠初级精母细胞（GC-2 spd）凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl2（0、5和10μmol/L）染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体；TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况；在不含/含CdCl2（10μmol/L）的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（60μmol/L）、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂（50 nmol/L）、自噬激动剂雷帕霉素（50 nmol/L）和溶酶体抑制剂氯喹（10μmol/L）处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl2染毒细胞24 h后，自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示，5和10μmol/L CdCl2染毒组LC3II/LC3I蛋白表达水平与对照组（5.50±0.56）相比分别升高为9.23±0.81和12.15±0.80（P2组相比，3-MA处理后LC3II/LC3I、LC3II、P62、cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平分别下降为0.90±0.07（CdCl2组为1.47±0.06）、1.57±0.14（CdCl2组为2.45±0.29）、0.82±0.05（CdCl2组为1.44±0.18）、0.18±0.01（CdCl2组为0.28±0.01）和0.61±0.84（CdCl2组为1.15±0.04）(P值均2组相比，zVAD-FMK处理后cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平分别下降为0.12±0.01（CdCl2组为0.28±0.01）和0.34±0.01（CdCl2组为1.15±0.04）(P值均0.05）。与CdCl2组相比，RAPA能增强CdCl2诱导的LC3II/LC3I、LC3II和P62蛋白表达水平，分别为2.22±0.21（CdCl2组为1.56±0.06）、3.72±0.21（CdCl2组为2.97±0.15）和2.41±0.19（CdCl2组为1.52±0.35）(P值均2组比较，CdCl2与CQ处理组LC3II/LC3I、LC3II、P62和cleaved Caspase-3的表达水平明显增加为3.21±0.31（CdCl2组为2.09±0.25）、4.49±0.43（CdCl2组为2.72±0.26）、2.59±0.19（CdCl2组为1.84±0.19）和2.43±0.23（CdCl2组为1.50±0.27）(P值均<0.05)。结论 氯化镉可能通过抑制自噬体-溶酶体融合阻滞自噬通量，促使自噬体异常聚集，诱导小鼠初级精母细胞发生凋亡。

• 单位
  武汉科技大学; 公共卫生学院