3-甾酮-Δ~1-脱氢酶的融合表达及纯化

作者：李玉; 路福平; 李斌; 杜连祥

来源：化学与生物工程, 2006, (09): 34-37.

• 3-甾酮-Δ1-脱氢酶
• 融合表达
• 包涵体
• 转化

3-甾酮-Δ1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶,能催化3-甾酮化合物在C1,2位处脱氢,提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a,实现了简单节杆菌3-甾酮-Δ1-脱氢酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析,并用分光光度法检测酶的活力。结果表明,表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白,复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。

• 单位
  生物工程学院; 天津科技大学