广西莪术ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

作者：林敬祯; 甘梓静; 谭勇^*; 黄鼎; 吴霞; 黄晓东

来源：生物技术, 2023, 33(04): 422-441.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.04.0063

• 广西莪术
• ISSR-PCR体系优化
• 正交设计
• 引物筛选
• 种质资源

[目的]建立和优化广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G·Lee et C·F.Liang)的ISSR-PCR反应体系。[方法]通过单因素及正交试验设计研究模板DNA含量、Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度对广西莪术ISSR-PCR反应的影响。[结果]25μL广西莪术的ISSR-PCR最佳反应体系为模板DNA用量30 ng, Mg2+ 2.25 mol/L,dNTPs 2.5 mol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq DNA聚合酶用量1.25 U;利用该体系从100条ISSR引物中进行初筛和复筛，筛选出14条引物。[结论]优化建立的广西莪术ISSR-PCR反应体系稳定可靠，可用于广西莪术遗传多样性分析及种质资源保护研究。

• 单位
  广西中医药大学