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摘要
犬诺如病毒(CNV)是一种致犬腹泻的病原,目前中国大陆尚无关于CNV的报道,为建立特异灵敏的检测CNV的RT-PCR方法,本研究选择CNV RdRp基因作为靶基因,设计引物,并通过对反应体系及条件的优化,建立了检测CNV的RT-PCR方法。利用该方法同时检测CNV、犬瘟热病毒、犬冠状病毒、犬轮状病毒、犬星状病毒、犬库布病毒、犬细小病毒2型、犬腺病毒2型、犬微小病毒、犬圆环病毒和犬源大肠杆菌、犬源沙门氏菌等致犬腹泻的病原,结果显示该方法仅对CNV检测为阳性,而对其他病原检测均为阴性,特异性较强;将pMD-RdRp标准品10倍倍比稀释后利用该方法检测,结果显示对pMD-RdRp标准品的检测下限为4.64×103拷贝/μL,敏感性较高;批内、批间重复性试验结果一致,重复性较好。利用该方法和国外文献报道的3种RT-PCR方法同时对107份犬腹泻样品进行检测,结果显示该方法对CNV的检出率为4.67%(5/107),其他3种方法的检出率分别为0(0/107)、0.93%(1/107)、0.93%(1/107)。从5份CNV阳性样品中扩增了4条完整的RdRp基因,测序并且比对结果显示,4个完整RdRp基因序列聚为2个大支,表明中国大陆流行的CNV至少有2种不同的RdRp基因型。本实验建立了检测CNV的RT-PCR方法,并首次证明CNV在中国大陆存在,为国内犬腹泻的防控提供了重要参考。
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