肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体的构建及其在A549细胞中的表达

作者：**; 袁红艳; 朱明光; 常雅萍

来源：中国生物制品学杂志, 2007, 20(6): 402-405.

DOI：10.3969/j.issn.1004-5503.2007.06.003

• 肿瘤抑制基因
• 真核表达
• A549细胞

目的 构建肿瘤抑制基因WWOX的真核表达载体,并观察其在人肺腺癌细胞A549中的表达.方法 采用RT-PCR法,从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因,将其克隆至pMD18-T载体上,测序后定向连接到真核表达载体pEGFP-C1中,构建真核表达载体pEGFP-C1-WWOX,并用脂质体转染至A549细胞中,采用共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)与WWOX的融合蛋白在A549细胞中的表达.结果 测序结果显示,RT-PCR法获得的WWOX全编码序列与GenBank中报道的序列一致.真核表达载体pEGFP-C1-WWOX转染A549细胞48 h后,共聚焦显微镜观察到细胞中有绿色荧光呈现,RT-PCR观察到WWOX基因得到有效转录.结论 已成功构建了肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体pEGFP-C1-WWOX,并在A549细胞中表达了WWOX和GFP融合蛋白.

• 单位
  吉林大学; 基础医学院