甲酸诱导细胞凋亡与自噬的实验研究

作者：陈楠; 郝乐乐; 严姣; 李亚妮; 刘贺荣

来源：宁夏医科大学学报, 2020, 42(12): 1195-1200.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2020.12.002

• 甲酸
• PC12细胞
• 凋亡
• 自噬

目的通过实验研究凋亡及自噬相关因子表达变化,探讨甲酸对细胞凋亡及自噬的影响,为甲酸诱导凋亡及自噬的发生机制提供实验依据。方法取对数生长期的PC12细胞,采用CCK-8法检测染毒不同浓度(0、8.32、10.40、12.48、14.56、16.64、18.72 mmol·L-1)、不同时间(0、6、12、24、36、48 h)对细胞存活率的影响,确定后续实验染毒浓度为0、8.32、12.48、16.64 mmol·L-1,染毒时间为24 h。采用吖啶橙溴乙锭(AO/EB)染色初步观察PC12细胞凋亡情况;采用Annexin V-FITC/PI双染定量检测不同浓度的甲酸染毒PC12细胞的凋亡率;采用MDC染色法观察甲酸诱导PC12细胞自噬的情况;采用Western blot技术检测自噬相关蛋白P62、Beclin1、LC3的表达水平。结果确定甲酸的染毒浓度0、8.32、12.48、16.64 mmol·L-1为后续实验浓度,染毒时间为24 h。细胞经AO/EB双染后,对照组绝大部分着绿色,有极少量凋亡的细胞;随着甲酸浓度的增加,晚期凋亡细胞均增多,细胞染色呈桔红色,细胞的体积逐渐变小;不同浓度的甲酸染毒PC12细胞,凋亡率随着甲酸浓度的增加而增加(P均<0.01)。MDC染色后对照组可见极少量的蓝色荧光,随着甲酸浓度的增高,蓝色荧光增多(P均<0.05)。自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1相对表达量呈浓度依赖性,而P62蛋白相对表达量逐渐降低(P均<0.01)。结论甲酸能够诱导PC12细胞死亡,可能与干扰自噬与凋亡过程有关。

• 单位
  宁夏医科大学