自噬在氢减轻LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤中的作用

作者：陈红光; 毛幸; 张鹏; 田婧; 王桂平; 白广; 谢克亮; 于泳浩^*

来源：中华麻醉学杂志, 2019, 39(01): 89-92.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-1416.2019.01.023

• 氢
• 内毒素类
• 巨噬细胞
• 线粒体
• 自噬

目的评价自噬在氢减轻LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤中的作用。方法常规培养小鼠RAW264.7细胞, 采用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(Con组)、LPS组、LPS+氢组(LPS+H2组)和LPS+氢+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(LPS+H2+3-MA组)。LPS组给予终浓度为1 μg/ml的LPS孵育6 h;LPS+H2组给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为0.6 mmol/L的含氢培养液孵育6 h;LPS+H2+3-MA组先给予终浓度为2 mmol/L的3-MA孵育1 h, 然后给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为0.6 mmol/L的含氢培养液孵育6 h。采用Clark氧电极法测定线粒体呼吸控制率(RCR), 采用JC-1法测定线粒体膜电位(MMP), 透射电镜下计数自噬体, 采用Western blot法测定细胞PTEN诱导的蛋白激酶1(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和Beclin-1的表达。结果与Con组比较, LPS组RCR和MMP降低, PINK1、Parkin、LC3Ⅱ和Beclin-1表达上调, 自噬体计数升高(P<0.05);与LPS组比较, LPS+H2组RCR和MMP升高, PINK1、Parkin、LC3Ⅱ和Beclin-1表达上调, 自噬体计数升高(P<0.05);与LPS+H2组比较, LPS+H2+3-MA组RCR和MMP降低, PINK1、Parkin、LC3Ⅱ和Beclin-1表达下调, 自噬体计数降低(P<0.05)。结论自噬增强参与了氢减轻LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤。

• 单位
  天津医科大学总医院