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摘要
旨在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3蛋白单克隆抗体及解析其抗原表位。本研究构建了PRRSV类NADC30毒株FJ1402的GP3大肠杆菌表达质粒，制备获得重组GP3蛋白。经过免疫BALB/c小鼠和间接ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞。利用间接免疫荧光试验和蛋白印迹鉴定单克隆抗体特异性。通过构建GP3蛋白基因截短体和合成多肽ELISA鉴定单克隆抗体识别的表位区域。结果显示，成功筛选了7株稳定分泌GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞株，7株单克隆抗体均可与PRRSV FJ1402产生特异性反应。鉴定出GP3蛋白4个抗原表位，分别为55PLCPTRQAAAEILE68、69PGKSFWCRI77、78GHDRCSESDH87和88DELGFMVPPGLSS100。2E12单抗与FJ1402、BB0907和S1三个谱系毒株均可发生IFA和Western blot特异反应，4H9、9F3和6B3单抗只与FJ1402毒株反应，而不与BB0907和S1毒株反应。本研究研制成功7株GP3蛋白单克隆抗体，并鉴定出4个GP3蛋白抗原表位，为PRRSV检测和GP3蛋白功能研究提供了重要工具。
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