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摘要
[目的]为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用,克隆人canstatin基因,并在COS7细胞中表达出具有 生物活性的canstatin。[方法]利用RT-PCR技术,从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatin cDNA,并定向克隆入真核表达载 体pSeeTag2C中。用脂质体转染法,将重组质粒pSecTag2C-canstatin转入COS7细胞。培养48 h后,对转化的COS7细胞行PCR 和Western-blot鉴定,用MTT法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用。[结果]从人脐静脉血管内皮细胞中 扩增出canstatin cDNA片段。测序结果显示,克隆的canstatin cDNA长684 bp,序列与文献报道一致。从pSecTag2C-canstatin转 化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段,Westem-blot结果显示,转化的COS7细胞中有特异的34 kDa的 canstatin表达。MTT检测显示,表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖。[结论] 构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin,在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin。
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