旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达

作者：盖文燕; 李文卉; 王鸿盛; 姚菊霞; 曲自刚; 王艳华; 张德林; 付宝权

来源：中国兽医科学, 2010, (05): 470-474.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2010.05.018

• 旋毛虫
• 丝氨酸蛋白酶抑制因子
• 重组蛋白
• 抗原性 Trichinella spiralis
• serine proteinase inhibitor
• recombinant protein
• antigenicity

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室