2型猪链球菌SrtA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

作者：丁晨曦; 艾乐乐; 龚秀芳; 胡丹; 陈家锋; 郭晓璐; 潘秀珍; 王长军

来源：中国病原生物学杂志, 2017, 12(12): 1144-1147.

DOI：10.13350/j.cjpb.171203

• 2型猪链球菌
• Sortase A
• 原核表达
• 单克隆抗体

目的制备并鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)强毒株05ZYH33分选酶A(Sortase A,SrtA)的单克隆抗体。方法 PCR扩增2型猪链球菌05ZYH33菌株基因组SrtA全长,构建表达质粒pETDuet-1/SrtA,导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达SrtA蛋白,柱纯化后免疫BALB/c雌鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,收集培养上清并制备小鼠腹水,采用Western blot单克隆抗体特异性,ELISA检测单抗效价。结果筛选到1株能持久、稳定分泌抗SrtA蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,标记为1F5,抗体亚型为IgM型/κ链;Western blot显示该抗体能识别SrtA蛋白。结论成功制备分泌抗SrtA蛋白的杂交瘤细胞株,制备的单抗效价高,为研究2型猪链球菌感染致病过程中SrtA的作用奠定了基础。

• 单位
  中国人民解放军南京军区军事医学研究所; 第三军医大学