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摘要
【目的】为克隆获得南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的P7-2基因并实现其原核表达。【方法】利用RT-PCR技术从感染SRBSDV的水稻叶片中扩增出P7-2基因。利用Gateway重组技术将基因P7-2整合到原核表达载体p DEST17上，获得重组原核表达载体p DEST17-P7-2。随后将原核表达载体p DEST17-P7-2转化到原核表达菌株Rosetta中。利用IPTG诱导P7-2蛋白表达并优化其诱导条件。【结果】利用RT-PCR技术扩增得到基因P7-2，其大小为930bp。测序结果表明获得原核表达载体p DEST17-P7-2。菌液PCR鉴定了原核表达阳性菌株。在温度为28℃、IPTG浓度为0.1mmol/L诱导表达8h，可获得大量大小约为42k Da含HIS标签的融合蛋白。【结论】克隆获得了SRBSDV P7-2的基因序列，实现了该基因的原核表达并探索其最佳诱导条件，为南方水稻黑条矮缩病的田间诊断、预测预报及P7-2的功能研究奠定了基础。
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