TWIST调控miR-145表达促进胶质瘤干细胞侵袭、迁移的实验研究

作者：李振江; 孙德超; 孔晨旭; 耿亚东; 徐晨阳; 丁炳谦

来源：现代肿瘤医学, 2022, 30(08): 1348-1353.

• 转录因子TWIST
• 微小RNA-145
• 胶质瘤干细胞
• 侵袭
• 迁移

目的:探究转录因子TWIST对胶质瘤干细胞侵袭、迁移的影响，并探讨与微小RNA(microRNA,miR)-145之间的关系。方法:以人神经胶质瘤细胞U251为研究对象，提取干细胞并经免疫荧光染色CD133、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)鉴定。实验分组：对照组、过表达对照组、TWIST过表达组、沉默对照组、TWIST沉默组，分别用pcDNA3、pcDNA3-TWIST、pGPH1-shNC、pGP-TWIST-shRNA转染提取并鉴定后的干细胞。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各细胞中TWIST mRNA和miR-145水平；蛋白质免疫印迹实验检测细胞中TWIST、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2、MMP-9蛋白水平；Transwell检测细胞侵袭和迁移情况；划痕实验检测细胞迁移情况；双荧光素酶鉴定miR-145与TWIST的靶向关系。结果:干细胞分选与鉴定：CD133阳性干细胞约占5.6%左右；分选后细胞用CD133和GFAP染色显示双阳性。与对照组相比，TWIST过表达组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平，细胞侵袭、迁移数量，愈合率，细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),miR-145水平降低(P<0.05);TWIST沉默组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平，细胞侵袭、迁移数量，愈合率，细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),miR-145水平升高(P<0.05)；过表达对照组、沉默对照组上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-145与TWIST存在结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论：升高TWIST能够促进胶质瘤干细胞侵袭、迁移，且能靶向miR-145发挥作用。

• 单位
  河南大学淮河医院