抗菌肽-裂解酶双机制抗菌蛋白质的设计与可溶性表达

作者：汪婷婷; 戴佳咪; 郑永祥; 余蓉; 张纯^*

来源：华西药学杂志, 2022, 37(01): 6-10.

DOI：10.13375/j.cnki.wcjps.2022.01.002

• 绵羊骨髓细胞抗菌肽
• 裂解酶
• 双机制
• 抗菌蛋白
• 重组蛋白
• 小分子泛素样修饰蛋白标签
• 可溶性表达
• 革兰氏阴性菌

目的针对G-菌外膜阻挡裂解酶发挥作用的情况,设计抗菌肽-裂解酶双机制抗菌蛋白,并优化表达体系,获得可溶性表达的抗菌蛋白质。方法采用同源模建方法将绵羊骨髓细胞抗菌肽与源自噬菌体JD010的裂解酶融合设计新的抗菌蛋白质(SMAP-Lysin)。通过构建pET30a、pBV220表达载体的方式,利用小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)的促溶作用,促进SMAP-Lysin的可溶性表达。结果仅在pBV220载体上,SMAP-Lysin有明显的表达,但其表达过程会诱导宿主细菌的死亡,无法有效分离纯化目标蛋白质;通过SUMO标签的促溶作用,可实现SMAP-Lysin的融合表达,且SUMO肽段的融合避免了宿主细菌的死亡;采用亲和层析,酶切步骤处理后,可得到纯化的抗菌蛋白质SMAP-Lysin。结论大肠杆菌是用于表达重组蛋白质的重要工程菌,采用SUMO标签融合表达的方式可有效降低抗菌蛋白对表达菌宿主的毒性,提高抗菌蛋白的可溶性表达,有利于抗菌蛋白的纯化。

• 单位
  四川大学