双氢睾酮对小鼠卵泡颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素表达的影响

作者：于凯; 赵玉芬; 翁钰; 王琴; 郝绍瑜; 于泊洋; 杜晨光; 苏布登格日勒; 李海军^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(08): 3036-3043.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.08.019

• 小鼠
• 颗粒细胞
• 双氢睾酮(DHT)
• 雄激素受体(AR)
• 抗缪勒管激素(AMH)
• 细胞增殖

【目的】探讨双氢睾酮(DHT)对小鼠颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素(AMH)表达的影响。【方法】给3周龄的昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG,10 IU/只)以获取颗粒细胞，颗粒细胞传代后48 h HE染色鉴定形态，绘制颗粒细胞的生长曲线，免疫荧光法鉴定促卵泡素受体(FSHR)的表达。当第2代颗粒细胞汇合度达到50%时，先用无血清的DMEM/F12培养基饥饿处理12 h,然后在培养基中添加不同浓度的DHT(0、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L),培养48 h后检测颗粒细胞增殖情况，实时荧光定量PCR法及ELISA法分别测定AMH基因及蛋白的表达。在颗粒细胞培养液中分别添加10-6 mol/L Flutamide(雄激素受体(AR)特异性抑制剂)、10-7 mol/L DHT、10-7 mol/L DHT+10-6 mol/L Flutamide、10-5 mol/L DHT、10-5mol/L DHT+10-8 mol/L 11-ketodihydrotestosterone(AR特异性激动剂),分别记为F、D7、DF、D5、DK组，以不添加药物为对照组。培养48 h后，检测各组颗粒细胞增殖及AMH蛋白含量。【结果】体外培养的小鼠颗粒细胞呈梭形或铺路石状，生长曲线呈S形，细胞普遍表达FSHR;与0 mol/L DHT组相比，10-8、10-7 mol/L DHT组细胞增殖分别显著和极显著增加(P<0.05;P<0.01),10-5 mol/L DHT组细胞增殖显著降低(P<0.05);10-7 mol/L DHT组AMH基因的相对表达量和AMH蛋白含量均极显著增加(P<0.01)。与D7组相比，DF组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著降低(P<0.01);与D5组相比，DK组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著升高(P<0.01)。【结论】10-7 mol/L DHT能够显著促进颗粒细胞增殖和AMH表达，而10-5 mol/L显著降低了颗粒细胞增殖以及AMH表达，且AR介导了DHT调控颗粒细胞增殖和AMH表达。

• 单位
  内蒙古农业大学; 基础医学院; 内蒙古医科大学