黄鳝肠道假单胞杆菌铁蛋白基因的克隆及融合表达

作者：臧彧伟; 王全禾; 杨龙; 李伟^*

来源：浙江农业学报, 2018, 30(11): 1819-1824.

• 假单胞杆菌
• 细菌铁蛋白
• 蛋白纯化
• 铁螯合

细菌铁蛋白(bacterioferritin,Bfr)在细菌铁代谢过程中具重要作用。为分析黄鳝肠道假单胞杆菌铁蛋白基因Bfr的功能,以该菌基因组DNA为模板,PCR扩增Bfr基因后将其克隆到pGEX-4T-1表达载体中。序列测定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导、GST-resin纯化柱分离纯化获得Bfr蛋白。用SDS-PAGE电泳及Western blot检测融合蛋白;用比色法检测融合蛋白的铁离子螯合能力,用液体培养法分析重组蛋白对假单胞杆菌生长的影响。实验结果表明:成功获得黄鳝肠道假单胞杆菌Bfr基因,并实现了Bfr基因的融合表达;带有融合标签的GST-Bfr蛋白与Fe3+和Fe2+均不能结合,而Bfr蛋白则可以结合Fe3+但不能结合Fe2+;在外源添加Fe3+情况下,重组Bfr蛋白可促进假单胞杆菌的营养生长。该研究为进一步深入了解假单胞杆菌铁蛋白基因的功能提供了参考资料。

• 单位
  生命科学学院; 长江大学