摘要
目的 建立裸鼹鼠乳鼠心脏成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定方法。方法 选取出生1~3 d的裸鼹鼠乳鼠,在冰上分离出乳鼠心脏,用眼科剪将心脏剪成约1 mm×1 mm×1 mm小块,采用胰蛋白酶和II型胶原酶先后消化法分离心脏成纤维细胞。在光学显微镜下观察心脏成纤维细胞形态特征变化,CCK-8法检测细胞增殖活性,蛋白质印迹和免疫荧光法检测细胞波形蛋白表达情况。结果 酶消化法分离的心脏成纤维细胞原代培养4 h已经完全贴壁,36 h即可铺满整个35 mm培养皿。传代培养2~3 d时心脏成纤维细胞增殖活力最强,蛋白质印迹和免疫荧光均证实细胞表达波形蛋白。结论 胰蛋白酶和II型胶原酶先后消化法分离裸鼹鼠乳鼠心脏成纤维细胞,可获得活力好且纯度高的心脏成纤维细胞。
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单位中国人民解放军第二军医大学; 基础医学院