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摘要
目的 探讨人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路的调控作用。方法 利用形觉剥夺法建立豚鼠左眼(实验眼)近视模型，右眼为对照眼，采用实时定量PCR法检测豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184以及PI3K-Akt信号通路相关mRNA的表达水平，采用Pearson相关分析豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR) mRNA表达水平的相关性。体外培养人巩膜成纤维细胞，并分为对照组(mimics对照组)、高表达组(转染miR-184 mimic)、低表达组(转染anti-miR-184)和PI-103组(加入PI3K通路抑制剂PI-103)。采用Western blot检测各组人巩膜成纤维细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达水平，流式细胞检测技术检测细胞增殖，Annexin V-FITC染色观察细胞凋亡。结果 豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均明显低于对照眼(均为P<0.05),且实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈正相关性(均为P<0.05)。体外实验中，培养24 h、48 h、72 h、96 h时，高表达组人巩膜成纤维细胞增殖倍数>对照组>低表达组>PI-103组；培养24 h时，4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h、72 h、96 h时，4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数整体比较以及组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。培养24 h时，4组人巩膜成纤维细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05),PI-103组>低表达组>对照组>高表达组，组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。培养72 h时，4组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平差异均有统计学意义(均为P<0.05),高表达组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平>对照组>低表达组>PI-103组，组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 近视眼的发生、发展与巩膜组织中miR-184表达下调有关，其作用机制可能为miR-184表达下调导致PI3K-Akt信号通路调控受阻，进而抑制巩膜成纤维细胞增殖以及促进细胞凋亡。
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