RNA结合蛋白FOX1对缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞氧化应激的影响

作者：许磊; 程帆; 周向军; 林方优; 饶婷; 宁金卓; 余伟民^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(03): 496-499.

• 肾小管上皮细胞
• 氧化应激
• 缺氧/复氧

目的探究RNA结合蛋白FOX1(RBFOX1)在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧(H/R)模型中对细胞氧化应激及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法构建HK-2细胞缺氧/复氧(缺氧16 h, 复氧4 h)模型, 实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测RBFOX1的基因表达水平。将HK2细胞随机分为Control组、H/R组、H/R+NC组、H/R+RBFOX1组;Control组细胞正常培养, H/R+NC组和H/R+RBFOX1组分别转染对照质粒及RBFOX1过表达质粒后行缺氧/复氧处理。比色法检测各组细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞仪检测各组细胞中活性氧(ROS)的含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组RBFOX1、Nrf2、磷酸化Nrf2(p-Nrf2)及HO-1的蛋白表达水平。多组差异比较采用单因素方差分析, 两两比较采用单样本t检验。结果 RT-qPCR结果显示缺氧/复氧处理后的HK-2细胞RBFOX1基因的表达量低于Control组(0.357±0.022比1.000±0.000, t=28.979, P<0.01)。Western blot结果也显示H/R组的RBFOX1表达量低于Control组(0.515±0.038比0.734±0.023, t=4.955, P<0.01)。H/R+RBFOX1组RBFOX1(0.942±0.074比0.515±0.038、0.629±0.080, F=10.932, P<0.05)、HO-1(0.839±0.068比0.638±0.033、0.622±0.052, F=5.167, P<0.05)的蛋白表达水平及p-Nrf2/Nrf2比值(0.864±0.034比0.577±0.047、0.541±0.058, F=13.896, P<0.01)明显高于H/R组和H/R+NC组, 与Control组差异无统计学意义(P>0.05)。ROS流式检测结果表明H/R+RBFOX1组的活性氧水平明显低于H/R组和H/R+NC组[(5.25±0.10)%比(8.98±0.12)%、(9.76±0.21)%, F=248.098, P<0.01];MDA酶标仪检测结果显示H/R+RBFOX1组的MDA含量明显低于H/R组和H/R+NC组(3.506±0.098比5.034±0.087、5.176±0.089, F=102.103, P<0.01);SOD酶标仪检测结果显示H/R+RBFOX1组内的SOD活性高于H/R组和H/R+NC组(0.415±0.011比0.215±0.003、0.250±0.030, F=32.681, P<0.01)。细胞凋亡流式检测结果表明H/R+RBFOX1组的细胞凋亡水平明显低于H/R组和H/R+NC组[(22.98±0.40)%比(28.70±0.68)%、(30.70±0.68)%, F=44.029, P<0.01], 但高于Control组[(22.98±0.40)%比(4.84±0.43)%, t=30.734, P<0.01]。结论 RBFOX1在HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型中具有抑制细胞氧化应激的作用, 这一作用与Nrf2/HO-1信号通路有关。

• 单位
  武汉大学人民医院