基因枪介导的普通小麦共转化体系的优化

作者：贺晓岚; 王建伟; 陈新宏^*; 李文旭; 汤宏

来源：农业生物技术学报, 2021, 29(01): 146-158.

• 共转化
• 基因表达盒
• 无标记
• 基因枪转化
• 无载体骨架
• 小麦
• β-葡萄糖醛酸酶基因(gus)
• bar

高效安全的转基因技术对于推进转基因植物商业化生产、降低食品和环境安全风险具有重要意义。共转化法是获得无标记转基因植物的有效手段,为了确立筛选基因(bar)与目的基因β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase, gus)共转化小麦(Triticum aestivum)的最佳摩尔比,建立安全高效的小麦共转化体系,本研究以普通小麦’科农199’为受体材料,完整质粒pAHC25为参照,采用基因枪介导法将Ubi-bar基因表达盒或pAHC20与Ubi-gus基因表达盒分别按摩尔比1∶1,1∶2,1∶3共6个独立共转化组合导入受体材料,经胚性愈伤组织诱导、选择培养、再生等过程筛选稳定转化子。结果表明,随着Ubi-gus摩尔浓度增加,gus基因瞬时表达率显著增加,但瞬时表达与稳定表达之间无相关性。不同组合之间转化率差异显著,其中以Ubi-bar或pAHC20∶Ubi-gus摩尔比1∶2转化率最高。Ubi-bar或p AHC20∶Ubi-gus摩尔比为1∶2时,完整质粒转化率显著低于最小表达盒,但是,摩尔比为1∶1或1∶3时,完整质粒显著高于最小表达盒的转化率。GUS染色和Southern blot检测结果表明,gus基因能在受体细胞中稳定整合、表达及遗传。除结实差,阳性株系在形态上与对照无差异。该转化体系的建立为小麦遗传转化研究打下了坚实的基础。

• 单位
  凯里学院; 西北农林科技大学; 河南省农业科学院小麦研究所