烟草18S rDNA染色体原位杂交技术优化研究

作者：王金英; 曹帅; 党江波; 梁国鲁^*; 杨超; 张艳; 陈益银

来源：中国烟草学报, 2019, 25(02): 78-84.

DOI：10.16472/j.chinatobacco.2018.271

• 烟草
• 18S rDNA
• 探针
• FISH
• 5S rDNA

荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)在细胞遗传学中有较多应用,其中重复序列常被作为探针来研究物种进化、分类。但现常用的探针序列均较长(200 bp-500 bp),杂交耗时较多。本研究以烟草(Nictiana tabacum)为材料,克隆并标记18S rDNA保守序列(254 bp),以其为探针对烟草染色体进行FISH,经18 h杂交获得了清晰的信号。在此基础上,利用荧光素直接标记引物序列(寡聚核苷酸),经较短时间(2 h)的杂交,也获得了清晰的信号。以寡聚核苷酸为探针对云烟87四倍体、N. tabacum-N. plumbaginifolia五倍体、烟草六倍体、云烟87八倍体以及N. plumbaginifolia的染色体进行杂交,均获得了良好效果。且杂交液可简化配制,洗脱过程也可简化。18S rDNA寡聚核苷酸探针与5S rDNA寡聚核苷酸探针结合,实现了N. plumbaginifolia的18S rDNA和5S rDNA双色FISH。所以,该寡聚核苷酸序列可以应用于烟草属植物18S rDNA(45S rDNA)位点的分析,且较大程度缩短了操作时间并简化了操作过程。

• 单位
  西南大学