楝酰胺对肝癌细胞的促凋亡作用及其机制

作者：楚蕾蕾; 高国伟; 杨桢桢; 杨留勤^*; 武莉萍

来源：山东医药, 2022, 62(06): 6-11.

• 楝酰胺
• 已糖激酶Ⅱ
• 抑凋亡因子类似物
• 细胞凋亡
• 肝肿瘤
• 肝癌

目的 观察加入楝酰胺（Rocaglamide,Roc-A）培养的人肝癌细胞株HepG2凋亡情况，并探讨其可能作用机制。方法 (1)加入不同浓度Roc-A培养的HepG2细胞凋亡情况观察：取对数生长期HepG2细胞，分为5组，分别加入0（空白对照）、25、50、100、200 nmol/L的Roc-A溶液，培养24 h时取各组细胞，采用YF488-Annexin V/PI荧光双染法观察细胞凋亡情况。(2)加入不同浓度Roc-A培养的HepG2细胞已糖激酶Ⅱ（HK2）、抑凋亡因子类似物（BCL2L1）mRNA检测：取对数生长期HepG2细胞，分为2组，分别加入0、100 nmol/L的Roc-A溶液，培养24 h时采用RT-qPCR法检测细胞HK2及BCL2L1 mRNA。(3)加入不同浓度Roc-A培养的HepG2细胞HK2、BCL2L1蛋白检测：取适量HepG2细胞，分为3组，分别加入0、100、200 nmol/L的Roc-A，培养24 h采用蛋白组学质谱分析法检测细胞HK2、BCL2L1蛋白。取对数生长期HepG2细胞分为5组，分别加入0、25、50、100、200 nmol/L的Roc-A溶液，培养24 h时采用Western Blotting法检测HK2、BCL2L1蛋白。(4)癌组织HK2表达与肝癌患者的生存时间关系分析：采用Kaplan Meier Plotter癌症数据库分析癌组织HK2表达与肝癌患者生存时间的关系。结果 加入0、25、50、100、200nmol/L的Roc-A溶液HepG2细胞凋亡率分别为0.83%±0.21%、9.46%±2.34%、24.68%±4.22%、39.60%±2.16%及58.63%±1.62%，组间两两比较，Р<0.05。随Roc-A溶液浓度增加，细胞凋亡率也随之增加。与空白对照比较，培养24 h时加入100 nmol/L Roc-A溶液的HepG2细胞HK2、BCL2L1 mRNA相对表达量均降低（Р均<0.05）。与空白对照比较，加入不同浓度Roc-A培养HepG2细胞HK2、BCL2L1蛋白相对表量均降低（P均<0.05）。与癌组织HK2高表达的肝癌患者比较，HK2低表达的肝癌患者的生存时间更长（Р<0.05）。结论 Roc-A促进HepG2细胞的凋亡，200 nmol/L的Roc-A促进HepG2细胞凋亡能力最佳。Roc-A促HepG2细胞凋亡的机制可能为Roc-A抑制HepG2细胞HK2、BCL2L1 mRNA及蛋白的表达。

• 单位
  新乡医学院; 新乡市中心医院