LB克隆系统的构建及在鞘氨醇单胞菌基因融合表达中的应用

作者：薛含; 李慧; 陈萌琦; 张再美; 郭中瑞; 朱虎; 王继乾; 孙亚伟

来源：生物工程学报, 2022, 38(04): 1576-1588.

DOI：10.13345/j.cjb.210440

• 鞘氨醇单胞菌
• 鞘氨醇胶
• LB克隆系统
• 基因融合
• 糖基转移酶

为摆脱限制性酶切位点不足的限制，构建可灵活改变多基因融合方向的表达载体，基于IIS型和IIT型限制性内切酶LguⅠ和Bbv CⅠ设计开发了LB克隆系统。该克隆系统是以广宿主质粒pBBR1MCS-3为初始载体，利用PCR的方法，在其多克隆位点区插入LB片段(GCTCTTCCTCAGC)构建得到的。LB片段含LguⅠ和BbvCⅠ部分重叠识别位点，经这两种限制性内切酶酶切后可以产生相同非回文序列，利用这一性质可快速、灵活地将多个基因逐步、定向插入表达载体。为验证该克隆系统的有效性，将鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.) WG中两个糖基转移酶基因welB、welK逐步定向融合至LB克隆载体，并将重组质粒转入鞘氨醇单胞菌中表达。结果表明，基因融合表达对鞘氨醇胶产量影响较小，但是，对鞘氨醇胶粘度有重要影响。在发酵84h时，重组菌株Sphingomonas sp. WG/pBBR1MCS-3-LB-welKB的发酵液粘度较野生株提高约24.7%，粘度提升将有助于该鞘氨醇胶在石油开采、食品等多个领域的应用。综上所述，以鞘氨醇单胞菌为研究对象，验证了LB克隆系统在多基因融合中的应用，为构建融合酶提供了一种高效的方法。

• 单位
  福建师范大学; 材料学院; 重质油国家重点实验室; 中国石油大学（华东）; 化学化工学院