蚊虫乙酰胆碱酯酶的真核表达、纯化及活性测定

作者：谭烽; 兰文升; 崔峰; 乔传令; 陈雯莉

来源：华中农业大学学报, 2012, (04): 423-427.

DOI：10.13300/j.cnki.hnlkxb.2012.04.010

• 有机磷农药
• 乙酰胆碱酯酶
• 昆虫杆状病毒表达系统
• 纯化酶
• 生物传感器 organic phosphorus pesticides
• acetylcholinesterase
• baculovirus expression system
• purified enzyme
• biosensor

利用Trizol法从尖音库蚊中提取总RNA,构建cDNA文库,并克隆出乙酰胆碱酯酶外显子序列;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对蚊虫乙酰胆碱酯酶进行真核表达,并利用Ni-琼脂糖对酶进行纯化。采用SDS-PAGE对纯化产物进行检测,结果表明得到了纯度较高的乙酰胆碱酯酶。参照Ellman法对酶的活性进行测定,结果显示纯酶的活力为2.219×10-4 mol/(min.g)。

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室; 农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室; 中国科学院动物研究所; 华中农业大学