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摘要
本研究以ASFV Pig/HLJ/18分离株基因组DNA为模板扩增tE183L基因片段，构建重组原核表达质粒pET-21a-tE183L。将其转化BL21（DE3）感受态细胞后经IPTG诱导表达的可溶性p54蛋白，采用镍亲和层析柱和分子筛纯化的p54与弗氏佐剂等比混合后免疫新西兰大白兔三次并采集血清，经Protein G亲和层析纯化得到兔抗p54多克隆抗体。研究结果表明，成功构建原核表达质粒pET-21a-tE183L，并获得大量的p54蛋白。Protein G亲和层析纯化出高质量的兔抗p54多抗。Western blot（WB）、间接免疫荧光（IFA）和免疫沉淀（IP）试验结果显示，纯化的抗p54多抗能特异性识别HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-ASFV p54蛋白和ASFV感染肺泡巨噬细胞（PAMs）后表达的ASFV p54蛋白。本研究成功表达和纯化可溶性p54蛋白；制备并纯化的抗p54的多克隆抗体，有良好的特异性，这为深入探讨ASFV p54蛋白的生物学功能奠定了基础。
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单位长江大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 动物科学学院; 兽医生物技术国家重点实验室
