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摘要
目的建立中国流行的C基因型HBV的稳定复制表达细胞系。方法从1例慢性乙肝患者血清中分离克隆得到1株C基因型病毒DNA全序列,以此为模板扩增产生1.3倍体HBV DNA,包含完整基因组(3.2kb)、从1825位点(polyA)至2599位点大小为775bp的3′端冗余序列,以及至1400位点大小为425bp的5′端冗余序列,将其连接改建重组后的pcDNA3.1( )载体,构建pN31-51-6-1表达质粒,转染肝癌细胞系HepG2。采用ELISA检测HBsAg、HBeAg的瞬时表达情况,选择双高表达细胞孔进一步行G418筛选稳定表达细胞系。通过ELISA、免疫组化、直接免疫荧光流式细胞术以及H...
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单位中国人民解放军军事医学科学院; 解放军第302医院
